中壓層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體，一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同，從而分離的一種層析法。

　　它的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于柱床面上。

　　此外，直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關(guān)。

　　主要特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)

　　1.高分離效率：在中壓條件下，流動(dòng)相的流速加快，從而提高了分離效率，尤其適用于快速純化需求。

　　2.良好的生物兼容性：采用醫(yī)療級(jí)聚丙烯材質(zhì)，對(duì)生物樣品具有良好的兼容性，減少了樣品污染和損失的風(fēng)險(xiǎn)。

　　3.靈活適用性：中壓層析柱可以裝填免疫親和、離子交換、凝膠過濾和反相等多種層析介質(zhì)，使其能夠廣泛應(yīng)用于抗體、蛋白和其他生物分子的純化。

　　4.串聯(lián)使用能力：多個(gè)中壓層析柱可以串聯(lián)使用，進(jìn)一步增強(qiáng)純化性能，滿足更復(fù)雜的純化需求。

　　應(yīng)用領(lǐng)域

　　1.蛋白純化：廣泛用于抗原抗體、重組蛋白的純化，如使用CommaX™ rProtein A, G, A/G預(yù)裝柱進(jìn)行抗體純化。

　　2.核酸純化：適用于核酸的分離和提純，特別是對(duì)于那些需要高純度核酸的應(yīng)用。

　　3.多肽和其他分子的純化：還可用于純化多肽和其他小分子，如使用CommaX™ His純化預(yù)裝柱進(jìn)行標(biāo)記蛋白純化。

　　下面讓我們一起來(lái)了解一下中壓層析柱過柱的技巧吧：

　　按過柱時(shí)的壓力可以分為：加壓，常壓，減壓。壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率較高的，但是時(shí)間也較長(zhǎng)，例如一些天然化合物的分離，有時(shí)一個(gè)柱子過幾個(gè)月也有可能。

　　減壓柱能夠減少硅膠的使用量，但是由于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)，有時(shí)會(huì)在柱子外面有水汽凝結(jié)，另外有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣，噪音大，時(shí)間長(zhǎng)，所以減壓過柱用得比較少。

　　加壓過柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，但用外加壓力可以使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵(用魚缸供氣的加壓泵就行)。特別是在容易分解的樣品的分離中很適用。

　　一般壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。因?yàn)榧訅哼^柱效率高，分離效果較好，所以加壓過柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是非常適用的。

　　一些低沸點(diǎn)溶劑裝柱時(shí)往往會(huì)在柱子中產(chǎn)生氣泡，使柱子變花，利用加壓過柱法在裝柱時(shí)就可以有效地解決這個(gè)問題，而且可以使柱子很快裝實(shí)。

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